Reprogramación celular del proepicardio mediada por microRNAs

Abstract

[ES]El proepicardio es el primordio embrionario del epicardio, la capa más externa del corazón. Las células del proepicardio, migran hasta la superficie miocardíaca, donde va a difundir para dar lugar al epicardio, a la vez que una subpoblación de este epicardio embrionario sufre un proceso de transición epitelio-mesequémica (EMT) e ingresa en el corazón dando lugar a los fibroblastos cardiacos y a parte de la musculatura vascular coronaria. Por ello el correcto desarrollo del epicardio es esencial para el desarrollo cardíaco normal. Además de su papel durante la embriogénesis, se ha demostrado que el epicardio adulto juega un papel esencial en procesos de regeneración miocárdica en modelos experimentales de daño cardiaco como el pez cebra asi como en ratones neonatales. Ello ha impulsado a considerar al epicardio como una posible herramienta reparadora del miocardio infartado. Por otro lado, los MiRNAs constituyen un nuevo grupo de RNAs no codificantes que regulan múltiples procesos biológicos mediante la supresión de la traducción o degradación de la transcripción de genes específicos. Se ha comprobado que la falta de función de miRNAs en el epicardio es de vital importancia para el desarrollo del mismo dado que la falta de función de Dicer, una ribonucleasa esencial en la maduración de la mayoría de los microRNAs, provoca severas alteraciones la formación de epicardio y por ende en la compactación de miocardio y su irrigación vascular. En nuestro laboratorio hemos diseñado una estrategia experimental para administrar microRNAs al proepicardio en formación in vitro y contribuir de esta forma a modular la diferenciación celular de estos precursores. En concreto hemos evidenciado que la sobre-expresión de miR-21, miR-27 y miR-100 respectivamente incrementan marcadores de EMT mientras que la administración de miR-23 y miR-195 lo disminuye. En este trabajo se ha diseccionado el proepicardio de embriones HH17, se han transfectado con miR-100 y miR-195, respectivamente, en gota colgante y posteriormente se han marcado con un colorante vital y se han transplantado a la cavidad pericardica de un embrión HH24. Nuestros resultados permiten determinar que nuestra técnica aislamiento, transfección, marcaje y transplante in vivo es factible y sugieren que los proepicardios tratados con miR-100 promueven más dispersión celular que los controles y/o que los tratados con miR-195.

[EN]The proepicardium is embryonic primordio of the epicardium, the outermost layer of the heart. The cells of proepicardium migrate to the cardiac surface, where they will spread and originate to the epicardium, which is essential for cardiac tissue development. Their study is interesting in the field of cardiovascular diseases in vertebrate organisms, with the aid of miRNAs, characterized by being a group of RNAs that regulate various biological processes by suppressing translation or degradation of the transcription of specific genes noncoding arm short (18-22BP), which, regulate gene expression of these proepicardial cells. It's know that the lack of function of miRNAs in the epicardium is vital for its development, it is found that if the enzyme that produces most of the miRNAs in the epicardium is removed, it's produced a malformation. The study focuses on the development of a technique specifically designed by cutting the proepicardium of an embryon HH17 in the heart of the chick embryo in a stage HH24. Using an proepicardium control each which is added miR-100 and another that is incorporated miR-195, in order to get a distinct cell differentiation and further adding a vital dye for the distinction thereof by fluorescence. Subsequent observation of the accession of in vivo on HH24 embryos and by histological sections of proepicardium performed with a precision microtome.